1. Micelarne strukture za stabilizacijo terapevtskih encimovAnja Zirdum, 2024, diplomsko delo Opis: Encimi so biološke molekule, sestavljene iz enega ali več polipeptidnih verig, ki se zvijejo v specifične tridimenzionalne oblike. Njihova specifična tridimenzionalna struktura omogoča vezavo substratov na aktivna mesta, kjer se izvajajo katalitične reakcije. Specifičnost encimov izhaja iz natančnega prileganja med encimom in substratom, kar pogosto opisujemo s pojmom "ključ-ključavnica". Vsak encim je tako usmerjen k določenemu substratu ali vrsti reakcije, kar omogoča visoko stopnjo regulacije in učinkovitosti v bioloških sistemih. Veliko prednost predstavlja imobilizacija encimov na trdne nosilce, kar omogoča njihovo ponovno uporabo in izboljša stabilnost ter učinkovitost encima. Uporaba imobiliziranih encimov je zaradi lažjega ločevanja od reakcijskih zmesi in posledično nižjih stroškov procesa vse bolj zaželena v industrijskih in biotehnoloških panogah. Encim transglutaminaza (TGM) se uporablja v različnih panogah, veliko vlogo ima predvsem v medicini in živilski panogi, kjer ga pogosto uporabljajo za izboljšanje teksture mesa, mlečnih izdelkov in drugih prehrambenih izdelkov.
Diplomsko delo najprej zajema proizvodnjo micelarnih struktur z gojenjem medicinske gobe Ganoderma lucidum v tekočem hranilnem mediju s sladnim in kvasnim ekstraktom pri 28 °C pri statičnih pogojih. Za tvorbo micelarnih struktur je bilo potrebno gojiti G. lucidum 14 dni. Povprečna debelina micelarnih struktur je bila 0,493 mm, povprečna masa pa 3,961 g. Proizvedene micelarne strukture so izkazale visoko sposobnost absorbiranja vode z doseženim odstotkom nabrekanja po 24 h 579,3 %. S FTIR analizo smo potrdili prisotnost proteinov, lipidov in polisaharidov, s SEM analizo pa prisotnost por in hif v micelarnih strukturah. Povprečni premer por je znašal 40 µm, povprečni premer hif pa 425 nm.
V nadaljevanju študije smo izvedli stabilizacijo terapevtskega encima TGM z imobilizacijo na sintetizirane micelarne strukture z metodo adsorpcije in določili učinkovitost in zmogljivost ujetja encima. Najvišja učinkovitost imobilizacije TGM v micelarne strukture je znašala 41,98 % , kar ustreza masi vgrajenega encima 8,97 g. S študijo sproščanja smo ugotovili, da se je encim uspešno adosrbiral, saj se encim niti po 24 h ni sprostil iz micelarnih struktur. Najverjetneje je adsorbirana TGM v micelarne strukture katalizirala tvorbo kavalentnih vezi med proteini in je prišlo do zamreženja TGM v notranjosti micelarnih struktur, ki vsebuje tudi proteine. Zato smo proučili potek encimske reakcije z imobiliziranim encimom v micelarne strukture pri različnih koncentracijah substrata in kinetiko imobiliziranega encima primerjali s kinetiko prostega encima. Določili smo kinetična parametra, kot sta Michaelis-Mentenova konstanta (KM) in maksimalna reakcijska hitrost (vmax) za prostiin imobilizirani encim z Lineweaver-Burkovim diagramom. Pri tem smo ugotovili, da ima sicer imobiliziran encim slabšo afiniteto do substrata kot prosti encim, zaradi višje izračunane vrednosti KM in nižje vmax.
Sledilo je proučevanje vpliva mase ujetega encima na potek encimske reakcije v odvisnosti od časa. Ugotovili smo, da z naraščanjem mase imobiliziranega encima, reakcija, torej pretvorba substrata v produkt, poteka hitreje. Pri najvišji možni ujeti masi encima (8,97 mg ) v micelarne strukture smo dosegli plato, saj ni bilo zaznati signifikantnih razlik med profilom poteka encimske reakcije med 8,97 mg (13 mg/mL) in 8,76 mg ujetega encima (10 mg/mL).
Imobilizacija encima na trdni nosilec je primerna za številne aplikacije. Z uspešno imobilizacijo encima TGM v micelarne strukture medicinske gobe G. lucidum, smo pripravilli stabilen funkcionalizirani naravni biokompozit, ki se lahko uporabi za različne biomedicinske aplikacije, predvsem za celjenje ran.
Ključne besede: Ganoderma lucidum, micelarne strukture, encimi, transglutaminaza, imobilizacija, encimski test
Objavljeno v DKUM: 26.09.2024; Ogledov: 0; Prenosov: 6
 Celotno besedilo (4,26 MB) |
2. Protimikrobna aktivnost funkcionaliziranih micelarnih struktur za terapevtske nameneAnja Mešl, 2024, magistrsko delo Opis: Glive predstavljajo dragocen vir prehranskih dopolnil, aminokislin, beljakovin, vitaminov, mineralov, ogljikovih hidratov in maščob. Proizvajajo številne bioaktivne spojine, ki jih lahko uporabljamo v industriji, biotehnologiji, farmaciji in medicini. Terapevtski gobi Ganoderma lucidum in Pleurotus ostreatus se že vrsto let uporabljata v zdravilne namene.
Cilj magistrske naloge je bil optimizirati pogoje rasti micelarnih struktur (MS), kot so pH, čas gojenja in vrsta hranilnega tekočega medija, saj ti pogoji bistveno vplivajo na rast micelija in izoblikovanje MS. Najvišjo prirast MS G. lucidum smo dosegli v hranilnem mediju z dodatkom sladnega ekstrakta, medtem ko za P. ostreatus v mediju z dodatkom glukoze. Ugotovili smo, da je bila pri obeh glivah zagotovljena najboljša rast pri pH 8,5. Nadalje smo z optimiranjem časa ugotovili, da sta za nastanek MS G. lucidum potrebna 2 tedna, medtem ko za P. ostreatus 3 tedni.
MS predstavljajo naravne, trajnostne in biorazgradljive materiale, ki se lahko uporabljajo tudi za terapevtske namene, kot je izdelava obližev za celjenje ran, saj se v njihovo strukturo učinkovito ujamejo različne učinkovine s protimikrobnimi lastnostmi. Proučevali smo morfologijo, kemijsko sestavo in hidrodinamične lastnosti pridobljenih MS. MS smo tudi funkcionalizirali z ultrazvočnim ekstraktom iz olupkov manga oz. antibiotikom ciprofloksacinom kot referenčno učinkovino. Primerjali smo njihove karakteristike z referenčnimi strukturami (MS brez funkcionalizacije z učinkovinami) ter določili učinkovitost ujetja, in vitro sproščanje ter protimikrobne lastnosti funkcionaliziranih MS. Rezultati kažejo na učinkovito ujetje učinkovin v MS obeh terapevtskih gob in postopno sproščanje učinkovin iz MS. Prav tako so MS z ekstraktom oz. antibiotikom uspešno zavirale rast Gram-negativnih (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa) in Gram-pozitivnih bakterij (Bacillus cereus, Staphylococcus aureus).
Ključne besede: micelarne strukture, Ganoderma lucidum, Pleurotus ostreatus, karakterizacija, funkcionalizacija, protimikrobnost
Objavljeno v DKUM: 16.07.2024; Ogledov: 165; Prenosov: 32
Celotno besedilo (4,85 MB) |
3. Aktivnost intracelularnih encimov iz gob z antikancerogenim delovanjem : diplomsko delo univerzitetnega študijskega programa I. stopnjeKaja Gajšt, 2023, diplomsko delo Opis: Zdravilne gobe se zaradi bogate sestave z bioaktivnimi spojinami, ki izkazujejo spekter zdravilnih lastnosti, vedno bolj uveljavljajo kot naravni vir zdravilnih učinkovin. Več raziskav dokazuje, da zdravilne gobe, kot sta Pleurotus ostreatus in Ganoderma lucidum, vsebujejo antioksidativne učinkovine. Diplomsko delo opisuje pridobivanje intracelularnih encimov iz razraščenih micelijev P. ostreatus in G. lucidum s homogeniziranjem in z izpostavljanjem v superkritičnem ogljikovem dioksidu (SC CO2). Osredotočili smo se na encime z antioksidativnim delovanjem, in sicer superoksid dismutazo, katalazo in peroksidazo ter proučevali njihovo aktivnost v pripravljenih vzorcih, ki smo jih pridobili iz gob z uporabo različnih metod za pridobivanje intracelularnih encimov. Zanimal nas je vpliv posamezne metode za pridobitev intracelularnih komponent iz micelija gob (homogenizacija ali izpostavitev v SC CO2) in uporabljenih parametrov (čas izpostavitve in tlak; v primeru uporabe SC CO2) na koncentracijo proteinov in aktivnost navedenih encimov v pridobljenih vzorcih.
Rezultati kažejo, da smo tako z uporabo homogenizatorja kakor tudi z izpostavitvijo micelija gob v SC CO2 uspešno odprli glivne celice saj smo v teh vzorcih določili višjo koncentracijo proteinov kot v primeru klasične ekstrakcije micelija gliv s pufrom (primerjalni vzorec). V vzorcih pridobljenih s homogenizacijo oz. izpostavljanjem v SC CO2 smo določili višjo aktivnost superoksid dismutaze in prisotnost katalaze, medtem ko je bila aktivnost peoksidaze nižja kot v primerjalnem vzorcu. Najvišjo aktivnost encimov smo zaznali v vzorcih, ki so bili izpostavljeni v SC CO2 pri 200 bar 5 ur. Ugotovili smo, da koncentracija proteinov v vzorcih s časom homogeniziranja in inkubiranja v SC CO2 ter z naraščanjem tlaka z izpostavitvijo v SC CO2 narašča.
Ključne besede: antioksidativni encimi, odpiranje celic, superkritični ogljikov dioksid, homogeniziranje, Ganoderma lucidum, Pleurotus ostreatus
Objavljeno v DKUM: 11.09.2023; Ogledov: 584; Prenosov: 63
Celotno besedilo (3,31 MB) |
4. Antioxidant, antibacterial, antitumor, antifungal, antiviral, anti-inflammatory, and nevro-protective activity of Ganoderma lucidum : an overviewDarija Cör Andrejč, Željko Knez, Maša Knez Marevci, 2022, pregledni znanstveni članek Opis: Ganoderma lucidum is a very medicinal mushroom that has been utilized in Oriental medicine for many years. It has a wide range of pharmacological and therapeutic properties, and has been used for many years as a health promoter. It contains various biologically active compounds that improve the immune system and have antioxidant, antitumor, anti-inflammatory, antifungal, and antimicrobial properties. Active compounds include triterpenoids and polysaccharides, as well as proteins, lipids, phenolics, sterols, etc. In the following review, we summarize briefly their biological activities, such as antioxidant, anti-bacterial, anti-fungal, antitumor, anti-viral, and anti-inflammatory activity. Although Ganoderma has a number of medicinal effects that have been confirmed by the in vitro and in vivo studies summarised in this review, there are some limitations. Clinical trials face mainly a lack of pure constituents. Accurate identification of the compounds obtained is also problematic. In addition, most of the included studies were small, and there were concerns about the methodological quality of each study. Studies have shown that Ganoderma has valuable potential for the prevention and treatment of cancer. In any case, G. lucidum cannot be used as first-line therapy for cancer.
Ključne besede: Ganoderma lucidum, bioactive function, active compounds, polysaccharides, triterpenoids
Objavljeno v DKUM: 16.08.2023; Ogledov: 324; Prenosov: 31
Celotno besedilo (1,26 MB)
Gradivo ima več datotek! Več... |
5. Antimikrobno delovanje učinkovin iz gobe Ganoderma lucidum : diplomsko delo univerzitetnega študijskega programa I. stopnjeTino Kovačič, 2022, diplomsko delo Opis: V diplomskem delu je predstavljeno antimikrobno delovanje različnih vzorcev gobe Ganoderma lucidum. G. lucidum ali svetlikava pološčenka je rdeče obarvana goba, ki raste na razpadajočih trdih delih dreves. Vsebuje veliko antioksidantov, ki imajo terapevtske učinke, zaradi česar je zelo priljubljena v medicini. Analizirani vzorci so bili v obliki olja in počenih spor iz različnih kapsul ter posušenih in zdrobljenih delov gobe (primordiji, trosnjaki, micelij in spore). Antimikrobno učinkovitost vzorcev smo proučevali z modificirano disk difuzijsko metodo. Izvedli smo študijo antimikrobne aktivnost čistih vzorcev kot tudi študijo antimikrobne aktivnost ekstraktov, pripravljenih z ultrazvočno in Soxhletovo ekstrakcijsko tehniko z vodo ali etanolom, kot topilom. Prav tako smo proučili antimikrobno učinkovitost treh komercialnih produktov. Testirali smo tudi inhibitorne lastnosti vzorcev na rast treh različnih mikroorganizmov, in sicer na rast Gram-pozitivne bakterije Staphylococcus aureus, Gram-negativne bakterije Escherichia coli in kvasovke Candida albicans. Najboljše antimikrobne lastnosti sta izkazovala vzorca pridobljena iz micelija iz trdnega gojišča in vodni ekstrakt trosnjakov, pridobljen z ultrazvočno ekstrakcijo.
V vzorcu vodnega ekstrakta trosnjakov, ki je najbolj uspešno zaviral rast testiranih mikroorganizmov, smo še določili prisotnost nekaterih pomembnih encimov s standardnimi encimskimi testi. Določili smo encimsko aktivnost α-amilaze, glukoamilaze, celulaze, lipaze, lakaze, katalaze, peroksidaze, proteaze, transglutaminaze in superoksid dismutaze, izmed katerih je v analiziranem vzorcu bila dosežena najvišja aktivnost encima superoksid dismutaze.
Ključne besede: Ganoderma lucidum, antimikrobna aktivnost, disk difuzijska metoda, inhibicija, encimi
Objavljeno v DKUM: 23.09.2022; Ogledov: 690; Prenosov: 85
Celotno besedilo (1,86 MB) |
6. Production of enzymes from medicinal mushrooms : master's thesisGonzalo Herranz Gómez, 2022, magistrsko delo Opis: The purpose of this master's thesis was to determine the ability of certain organisms of the kingdom Fungi to produce a series of enzymes in their active form by solid-state fermentation. In this study, two types of fungi were used, Pleurotus ostreatus and Ganoderma lucidum. For this purpose, different growth media, cultivation times (8 and 10 days), extraction procedures (shaking and homogenization) and extraction medium (distilled water, sodium citrate buffer and sodium phosphate buffer) were used.
First, for P. ostreatus mushroom, the optimization of the extraction procedure and time for isolation of enzymes in their active form (α-amylase, glucoamylase, cellulase, laccase, and protease) was studied. It was observed that the highest total protein concentration in mycelium extract was obtained by 8 min of homogenization (0.8607 mg/mL, and distilled water). Using the shaking procedure, the highest enzyme activities were achieved for α-amylase (24 h, 8.0413 U/mL, and sodium citrate buffer) and protease (3 h, 0.0040 U/mL, and sodium citrate buffer). With the homogenization process, the highest activities were achieved for the enzymes glucoamylase (10 min, 6.7113 U/mL, and sodium citrate buffer) and laccase (8 min, 12.2500 U/mL, and sodium citate buffer).
For the mushroom G. lucidum, the growth medium and the extraction procedure were optimized, using the same extraction medium (sodium citrate buffer). In this case, α-amylase, glucoamylase, cellulase, laccase, protease, catalase, peroxidase, superoxidase dismutase (SOD), and lipase were studied. It was observed that the highest total protein concentration was obtained with 4 min of homogenization (0.0338 mg/mL). Furthermore, using the homogenization process, the highest activities were achieved for α-amylase (4 min, 16.3459 U/mL) and SOD (4 min, 9.2615 U/mL). With the shaking procedure, the highest activities were achieved for cellulase (3 h, 1.6332 U/mL), lipase (3 h, 16.924 U/mL), glucoamylase (3 h, 14.6737 U/mL), peroxidase (3 h, 0.0156 U/mL), protease (3 h, 0.0080 U/mL) and laccase (24 h, 20.7083 U/mL).
Ključne besede: medicinal mushrooms, Pleurotus ostreatus, Ganoderma lucidum, total proteins, enzymes activities.
Objavljeno v DKUM: 06.07.2022; Ogledov: 1836; Prenosov: 42
Celotno besedilo (2,56 MB) |
7. EKSTRAKCIJA BIOLOŠKO AKTIVNIH SPOJIN IZ GANODERME LUCIDUM OB UPORABI ORGANSKIH TOPILDejan Turk, 2014, magistrsko delo Opis: Namen magistrskega dela je bil pridobiti in okarakterizirati ekstrakte iz trosnjakov in primodijev gobe Ganoderma lucidum. V ta namen smo izvedli klasično ekstrakcijo materiala z različnimi organskimi topili, pri dveh temperaturah (sobna, vroča). Sledila je kemijska karakterizacija ekstraktov, ki je obsegala določevanje vsebnosti skupnih fenolov, polisaharidov in proteinov. Določevanje biološke aktivnosti je obsegalo merjenje antioksidativne aktivnosti ekstraktov z DPPH• metodo in sposobnost zaviranja encima acetilholinesteraze z Ellmanovo metodo.
Rezultati so pokazali, da na izkoristke ekstrakcij vpliva polarnost topila. Izbira topila prav tako vpliva na vsebnosti skupnih fenolov, kjer smo pri ekstrakcijah z etanolom in acetonom zabeležili največje vsebnosti le teh. Polisaharide smo pridobivali po različnih v literaturi opisanih postopkih in ugotovili, da trosnjaki vsebujejo predvsem proste polisaharide, medtem ko primodiji vsebujejo veliko kompleksov fenol- polisaharid.
V ekstraktu pridobljenem iz primodijev G. lucidum beležimo petkrat večje vsebnosti proteinov, kot v ekstraktu pridobljenim iz trosnjaka gobe.
Največji odstotek zaviranja radikala DPPH smo izmerili po dodatku ekstrakta pridobljenega po vroči ekstrakciji z acetonom, tako pri trosnjakih kot pri primodijih. Antioksidativna aktivnost organskih ekstraktov sovpada z vsebnostjo skupnih fenolov. Ekstrakti bogati s polisaharidi pridobljeni iz trosnjakov so imeli večjo sposobnost zaviranja radikala DPPH v primerjavi z ekstrakti pridobljenih iz primodijev. Boljšo antioksidativno aktivnost je imel tudi ekstrakt bogat s proteini pridobljen iz trosnjakov v primerjavi z ekstraktom iz primodijev gobe.
Pri testu zaviranja encima acetilholinesteraza smo ugotovili, da imajo ekstrakti bogati z polarnimi kot nepolarnimi spojinami iz primodijev in trosnjakov G. lucidum sposobnost zaviranja encima. Največjo sposobnost zaviranja acetilholinesteraze so pokazali ekstrakti pridobljeni s heksanom iz primodijev G. lucidum.
Ključne besede: Ganoderma lucidum, trosnjaki, primodiji, klasična ekstrakcija, fenoli, polisaharidi, proteini, antioksidanti, zaviralci acetilholinesteraze
Objavljeno v DKUM: 04.12.2014; Ogledov: 2118; Prenosov: 258
Celotno besedilo (2,49 MB) |
