Iskanje po katalogu digitalne knjižnice

Opis: Redukcijski test z resazurinom temelji na sposobnosti metabolično aktivnih semenčic, da reducirajo redoks barvilo resazurin v resorufin. V diplomskem delu smo razvili spektrofotometrično aplikacijo redukcijskega testa z resazurinom za osemenjevalne doze merjaščevega semena. Uporabili smo 54 vzorcev. Redukcijo resazurina po opravljenem testu smo sledili z merjenjem absorbance v butanolnih ekstraktih pri valovni dolžini 610 nm, ki ustreza absorpcijskemu maksimumu za resazurin ter pri valovni dolžini 575 nm, ki ustreza maksimumu absorpcije za resorufin. Ponovljivost meritev smo določili z izračunom relativnega standardnega odmika. Ponovljivost meritev absorbanc v testu pri 610 nm in 575 nm je v obeh primerih ustrezna, pri določanju ponovljivosti med testi pa smo ugotovili, da je ta ustrezna za meritve A575, medtem ko relativni standardni odmik za meritve A610 ne ustreza zahtevam za ponovljivost meritev med testi. Korelacije med rezultati testa z resazurinom in spermalnim indeksom (koncentracija semenčic v vzorcu, pomnožena s kvadratnim korenom produkta med deležem progresivno gibljivih in deležem morfološko normalnih semenčic) smo izračunali z neparametričnim Spearmanovim koeficientom korelacije rangov. Najvišjo korelacijo smo ugotovili med spermalnim indeksom in A610 v testu z dodatkom 160 μl 1,8 mM resazurina po 60 min inkubaciji. Glede na to, da je ponovljivost meritev A610 neustrezna, smo za optimalne pogoje testa določili pogoje, pri katerih je bila korelacija med spermalnim indeksom in meritvami A575 najvišja, to je pri 40 min inkubaciji in dodatku 80 ml resazurina (r=0,654; P<0,0001). Ugotavljali smo možnost merjenja absorbance butanolnih ekstraktov, hranjenih pri 4°C, tudi v dnevih po izvedbi testa. Na podlagi razsevnih diagramov s premico linearne regresije smo ugotovili, da so parne meritve, izmerjene na dan izvedbe testa in 1. dan, 4. dan in 7. dan pri A575, blizu premici enakosti. Iz diagramov absolutnih razlik je razvidno, da je več kot 95 % absolutnih razlik znotraj mej ujemanja, kar potrjuje zadovoljivo ujemanje posameznih parnih meritev. Rezultati kažejo, da so butanolni ekstrakti stabilni, zato lahko redukcijo resazurina z merjenjem A575 določimo v roku enega tedna po izvedbi testa. Uporabnost testa je zato večja, saj ga izvedemo v terenskih pogojih, kjer spektrofotometer ni na voljo na dan izvedbe testa.
Ključne besede: veterinarska medicina, resazurin, seme, spektrofotometrija-metode
Objavljeno v DKUM: 27.06.2011; Ogledov: 3135; Prenosov: 100
Celotno besedilo (619,88 KB)