| | SLO | ENG | Piškotki in zasebnost

Večja pisava | Manjša pisava

Iskanje po katalogu digitalne knjižnice Pomoč

Iskalni niz: išči po
išči po
išči po
išči po
* po starem in bolonjskem študiju

Opcije:
  Ponastavi


1 - 1 / 1
Na začetekNa prejšnjo stran1Na naslednjo stranNa konec
1.
PRIMERJAVA RAZLIČNIH MOLEKULARNIH METOD ZA DIAGNOSTIKO CELIAKIJE
Neja Hrovat, 2013, diplomsko delo

Opis: Celiakija je ena izmed pogostejših imunskih bolezni, ki se razvije pri vnosu glutena pri genetsko dovzetnih posameznikih; poleg okoljskih dejavnikov k razvoju celiakije prispeva tudi genetska predispozicija. Večina bolnikov nosi genotip človeškega levkocitnega antigena HLA-DQ2 ali HLA-DQ8. To so heterodimerni proteini, katere najdemo na površju antigen predstavljajočih celic. Za diagnozo celiakije je potrebnih več preiskav. Med njimi so biopsija tankega črevesa, opazovanje stanja ob prehodu na brezglutensko dieto, serološke preiskave in genetski testi. Evropsko združenje za pediatrično gastroenterologijo, hepatologijo in prehrano (ESPGHAN) je za diagnostiko celiakije priporočilo določanje prisotnosti genetskega zapisa za HLA-DQ2 in HLA-DQ8, saj bolniki s celiakijo nosijo ta genetski zapis. Na podlagi tega smo se odločili za primerjavo dveh metod genetske diagnostike, SSP PCR in rt-PCR. SSP PCR je verižna reakcija s polimerazo z uporabo sekvenčno specifičnih začetnih oligonukleotidov; za to metodo smo uporabljali komercialni kit Olerup. rt-PCR pa je verižna reakcija s polimerazo v realnem času, kjer merimo količino produkta v vsakem ciklu med samo reakcijo, z merjenjem fluorescence. Za to metodo smo uporabljali komercialni kit Eligene. Analiza je bila opravljena na šestih vzorcih, od tega so štirje bolniki s celiakijo, potrjeni v slovenskih splošnih bolnišnicah. Rezultati obeh diagnostičnih testov se ne skladajo. Ugotovili smo, da se rezultati Eligene diagnostičnega kita skladajo s potrjenimi diagnozami postavljenimi v splošnih bolnišnicah, medtem ko za Olerup kit nismo potrdili diagnoz. Primerjava zahtevnosti izvedbe posameznega kita je pokazala, da je diagnostika z uporabo rt-PCR metode časovno manj zahtevna od SSP PCR metode in uporabniku bolj prijazna, saj zahteva manj priprave. Interpretacijo rezultatov uporabnik zlahka opravi sam. Slabost, ki bi jo izpostavili je, da potrebujemo real time aparaturo, ki je cenovno težje dostopna. Izvedba diagnostike z Olerup kitom se je izkazala za časovno bolj zahtevno kot diagnostika z Eligene kitom. Od uporabnika zahteva več časa za pripravo, izvaja se v 2 korakih. To sta reakcija PCR in analiza fragmentov na agarozem gelu. Pozitiven je razvoj programske opreme ki omogoča analizo, vendar je ta toliko bolj zahtevna, da je za interpretacijo rezultatov potrebna strokovna pomoč v podjetju šolanega osebja. V kolikor bi se morali odločiti med tema dvema kitoma, bi se odločili za diagnostiko rt-PCR z Eligene kitom.
Ključne besede: celiakija, PCR v realnem času, sekvenčno specifični PCR, genetska diagnostika
Objavljeno: 18.09.2013; Ogledov: 1838; Prenosov: 191
.pdf Celotno besedilo (8,74 MB)

Iskanje izvedeno v 0.05 sek.
Na vrh
Logotipi partnerjev Univerza v Mariboru Univerza v Ljubljani Univerza na Primorskem Univerza v Novi Gorici