2.
IMOBILIZACIJA ENCIMA [alfa] - AMILAZE V ZAMREŽENE ENCIMSKE SKUPKE (CLEA)Natalija Čurič, 2010, diplomsko delo
Opis: Delo opisuje pripravo katalitično aktivnih zamreženih encimskih skupkov iz encima α — amilaze ali na kratko CLEA. Postopek priprave zamreženih encimskih skupkov je bil razdeljen na dva ključna dela; na obarjanje topnega oziroma nativnega encima z ustreznim organskim topilom in zamreženje tako izoborjenega encima s pomočjo mrežnega povezovalca. Sinteza zamreženih encimskih skupkov je potekala pri stalni volumski koncentraciji mrežnega povezovalca (glutaraldehida, GA) 1 % (v/v) in obarjalnega reagenta (metanola) 90 % (v/v).V našem primeru smo aktivnost CLEA iz α - amilaze določili z reakcijo hidrolize škroba topnega v vodi. Optimalni reakcijski pogoji so bili doseženi pri koncentraciji proteinov iz encimskega preparata α — amilaze: γα - amilaza = 6 mg/mL in pri koncentraciji inertnega proteina albumina (EA): γEA = 2,5 mg/mL. Reakcija hidrolize škroba je potekala 3 h. Temperaturno stabilnost zamreženih encimskih skupkov smo določili po 30 minutni izpostavitvi CLEA pri različnih temperaturah. Vpliv temperature na reakcijo hidrolize škroba imobilizirane z α — amilazo smo določili v temperaturnem razponu od 45 °C do 110 °C. Stabilnost proste α — amilaze in zamreženih encimskih skupkov iz encima α — amilaze smo preučili tudi v superkritičnem ogljikovem dioksidu. Testirali smo tudi vpliv večkratne uporabe zamreženih encimskih skupkov na njihovo stabilnost.
Ključne besede: imobilizacija, α – amilaza, zamreženi encimski skupki, CLEA, glutaraldehid
Objavljeno: 25.05.2010; Ogledov: 3753; Prenosov: 355
Celotno besedilo (5,55 MB)
