1. Primerjava različnih vrst stekla za in situ karakterizacijo bioloških zdravil : diplomsko delo univerzitetnega študijskega programa I. stopnjeMaša Jagodič, 2025, undergraduate thesis Abstract: Biološka zdravila na osnovi proteinov se soočajo s problematiko stabilnosti pri različnih pogojih shranjevanja. Proteini so podvrženi agregaciji in razvijanju sekundarne strukture, ki povzročijo izgubo njihove primarne funkcije in lahko vodi do ogrožanja zdravja pacientov. Ti procesi so pospešeni pod stresnimi pogoji, kot sta povišana temperatura in , izpostavljenosti svetlobi. Trenutne metode za ocenjevanje strukturne integritete proteinov namreč zahtevajo predpripravo vzorcev in redčenje, pri čemer je povečana možnost človeške napake. Mednje spadajo spektroskopske metode kot so krožni dihroizem (CD), ultravijolična-vidna spektroskopija (UV-Vis) in Fourierjeva transformacijska infrardeča spektroskopija (FTIR). Zaradi inertnosti, so biološka zdravila najpogosteje shranjena v steklenih vialah, ki omogočajo izvajanje spektroskopskih metod. Naš cilj je bil preveriti, katere vrste stekla omogočajo razvoj metode na podlagi CD spektroskopije, s katero bo omogočena in situ analiza proteinov. Primerjali smo vpliv različnih vrst stekla na razvijanje sekundarne strukture proteina.V diplomskem delu smo preučevali tudi vpliv robnih pogojev na strukturo lizocima. To smo opazovali s snemanjem v kvarčnih kivetah, HPLC in farmacevtskih vialah.
Ugotovili smo, da pri spremenjenih pogojih, ne pride do razvijanja sekundarne strukture lizocima, ko pa se struktura spremeni, takoj nastopi agregacija. Primerjava stekla pripelje do zaključka, da je za snemanje v CD spektrometru pričakovano najbolj ugodna kvarčna kiveta. HPLC viala zaradi samo absorpcije in napetosti nad mejno vrednostjo nasičenja detektorja, ne omogoča izvajanje meritev.
Tako kvarčna kiveta, ki je specializirana za merjenje v CD spektru, kot tudi farmacevtska viala zadovoljita pogoje za snemanje v CD spektrometru.
Keywords: biološka zdravila, krožni dihroizem(CD), in situ karakterizacija, shranjevanje bioloških zdravil, vrste stekla
Published in DKUM: 09.09.2025; Views: 0; Downloads: 18
 Full text (4,28 MB) |
2. Koloidna stabilnost delcev tanina mletih v planetarnem mikromlinu : diplomsko delo univerzitetnega študijskega programa I. stopnjeKlara Perčič, 2025, undergraduate thesis Abstract: Tanini so polifenolne spojine, katere uvrščamo med naravne antioksidante in jih pridobivamo iz različnih delov rastlin. Od tega je odvisna tudi sama struktura molekule. Na podlagi strukture ločimo dve vrsti, kondenzirane in hidrolizirane. Tanini so, zaradi svojih lastnosti, zelo aplikativne spojine, katerih uporaba je razširjena na številnih področjih. Pomembni so tako za rastline kot pri ljudeh, saj zavirajo delovanje in razmnoževanje mikroorganizmov, ki povzročajo bolezenska stanja. Za njihovo učinkovito delovanje je stabilnost raztopine koloidov zelo pomemben dejavnik. Da dosežemo koloidno stabilnost, moramo zagotoviti ozko porazdelitev velikosti delcev in nižjo vrednost polidisperznega indeksa (PDI). Ena izmed metod, s katero vplivamo na ozko porazdelitev delcev je mletje. Z mletjem namreč povzročimo nastanek delcev manjšega hidrodinamskega premera mlevnega materiala, v primerjavi z izhodnim.
Diplomsko delo zajema študijo vpliva zmanjšanja velikosti delcev s pomočjo mletja, na koloidno stabilnost delcev tanina v vodnih suspenzijah. Delce smo mleli z uporabo planetarnega mikromlina in planetarnega krogličnega mlina, pri tem pa smo spreminjali procesne parametre, kot so razmerje med mlevnim materialom in mlevnimi kroglicami (1:15 in 1:20), čas mletja in število obratov. Pred izvedbo dela smo referenčni vzorec ovrednotili z uporabo metode dinamičnega sipanja svetlobe (DLS) in zeta potenciala, s termogravimetrično analizo (TGA) ter Fourierjevo transformacijsko infrardečo spektroskopijo (FTIR). Za določanje (končnega) premera zmletih delcev smo ponovno uporabili DLS, merjenje antioksidativnosti pa smo spremljali z UV-Vis spektrofotometrom.
Keywords: tanin, koloidna stabilnost, mletje, hidrodinamski premer delcev, karakterizacija
Published in DKUM: 09.09.2025; Views: 0; Downloads: 0
Full text (2,97 MB) |
3. Fizikalno-Kemijska in morfološka primerjava celuloze iz različnih virov : diplomsko deloMichela Sossi, 2025, undergraduate thesis Abstract: V diplomskem delu je bila narejena primerjava med celuloznimi materiali iz treh različnih virov, t. j. bombaža, lesa in bakterij glede na fizikalno-kemijske in morfološke lastnosti. Cilj raziskave je bil ugotoviti, kako izvor in način priprave materiala na osnovi celuloze vplivata na določene lastnosti, zlasti na sposobnost absorpcije barvil. Zastavljena hipoteza je predvidevala značilne razlike med vzorci glede na vir in pripravo. Za karakterizacijo materiala je bilo uporabljenih več metod, t.j. FTIR, SEM, optična mikroskopija, UV-VIS, gravimetrija, in goniometrija. Na podlagi rezultatov je bilo ugotovljeno, da vir in način priprave celuloze izrazito vpliva na morfološko strukturo, hidrofilnost in zmožnost adsorpcije barvila, pri čem je bilo potrjeno, da material iz bombažne celuloze je najbolj učinkovit in ima najvišjo kapaciteto adsorpcije barvila.
Keywords: bakterijska nanoceluloza, bombaž, karakterizacija, lastnosti, morfologija
Published in DKUM: 08.07.2025; Views: 0; Downloads: 17
Full text (9,84 MB) |
4. Comparison study of four commercial SARS-CoV-2-rapid antigen tests : characterisation of the individual componentsŽiga Jelen, Ivan Anžel, Rebeka Rudolf, 2022, original scientific article Abstract: During the corona virus (COVID-19) pandemic, there was a sharp increase in the need for diagnostic tests that could detect the presence of SARS-CoV-2 virus or its antibodies quickly and reliably. An important type in the group of diagnostic tests are rapid antigen lateral flow immuno-assay (LFIA) tests, which operate on the immuno-chromatographic principle with the lateral flow of analyte. Clinical practice in the last year has shown that such diagnostic tests can be effective in preventing the spread of the SARS-CoV-2 virus.The development, and, thus, the production of the rapid antigen LFIA tests, is influenced by a number of factors that determine their sensitivity and accuracy indirectly. These factors are directly dependent on the type of antibody produced, which is formed as an immune response when infected with the virus. The production of the rapid antigen LFIA tests is associated with the appropriate selection of basic components that determine the type and quality of these tests. The basic components include: substrates and membranes, antigens, antibody labels and compatible buffers. The correct choice of membranes and their materials is crucial to compiling an effective rapid antigen LFIA test. This study therefore presents a comparative analysis of four commercially available SARS-CoV-2-rapid LFIA tests using state-of-the-art characterisation techniques scanning electron microscopy (SEM), inductively coupled plasma-optical emission spectrometry (ICP-OES), environmental scanning electron microscope / energy-dispersive X-ray spectroscopy (ESEM/EDX), Fourier-transform infrared spectroscopy / attenuated total reflection (FTIR/ATR) for the individual components. The obtained results were the starting point for the development and assembling of our own rapid antigen LFIA test based on gold nanoparticles as antibody labels.
Keywords: hitri antigenski testi, komponente, karakterizacija, analize, rapid antigen test, components, characterisation, analysis
Published in DKUM: 26.03.2025; Views: 0; Downloads: 5
 Link to full text
This document has many files! More... |
5. Uporaba globoko evtektičnega topila pri procesu hidrotermalne karbonizacije : diplomsko delo visokošolskega strokovnega študijskega programa I. stopnjeNina Travnikar, 2024, master's thesis Abstract: Namen magistrskega dela je bila termična obdelava konopljine pogače s hidrotermalno karbonizacijo (HTC). Namesto vode, ki se običajno uporablja kot tekoči reakcijski medij pri HTC procesu, smo za izvedbo eksperimentov uporabili globoko evtektično topilo (DES) - mešanico glikolne kisline in holin klorida (ChCl). Hidrotermalno karbonizacijo smo izvajali pri obratovalni temperaturi 200 °C in razmerju DES:voda 1:3. Preverili smo tudi vpliv spremembe temperature (170 °C), spremembe razmerja DES:voda (1:9) in dodatka katalizatorjev FeCl3 in FeSO4 na karakteristike hidro-oglja in procesne tekočine. Prav tako smo preučili vpliv same sestave DES topila na lastnosti HTC produktov, pri čemer smo uporabili dve različni razmerji glikolne kisline in ChCl (1:1 in 2:1). Produkte smo kemijsko karakterizirali in preverili možnost njihove uporabe za gorivo in v kmetijstvu. Karakterizacijo surovin in hidro-oglja smo izvedli z meritvijo kurilne vrednosti, elementarno analizo in FTIR analizo. Izvedi smo tudi proksimativno analizo s TGA analizatorjem, s katero smo določili vsebnost hlapnih snovi, pepela in fiksnega ogljika. V procesnih tekočinah smo izvedli meritve TOC, amonijev dušik, KPK, vsebnost skupnih fenolov, skupni dušik, KMK, genotoksičnost in strupenost za sladkovodne mikroorganizme. Z ICP-AES analizo smo preverili vsebnost kovin v procesnih tekočinah in hidro-oglju. Za preizkušanje možnosti uporabe hidro-oglja in procesne tekočine kot izboljševalca tal smo izvedli teste spremenljivosti za rastline z vrtno krešo.
Hidrotermalna karbonizacija z uporabo globoko evtektičnega topila je proizvedla hidro-oglje s povišano vsebnostjo ogljika, hlapnih snovi in višjo kurilno vrednostjo. FTIR analiza je pokazala spremembe v hidroksilnih in alifatičnih spojinah. V procesnih tekočinah smo zaznali povišanje vsebnosti TOC, KPK, skupnega in amonijevega dušika ter fenolnih spojin. Procesne tekočine niso genotoksične, vendar so pokazale strupenost do mikroorganizmov. Hidro-oglja so se izkazala kot primerna za uporabo kot izboljševalec tal v kmetijstvu, medtem ko procesna tekočina ni uporabna, zaradi nizkega pH in visoke prevodnosti.
Sestava DES topila, razmerje DES:voda ter sprememba temperature HTC torej pomembno vplivajo na fizikalno-kemijske lastnosti nastalih produktov. Dodatek katalizatorja se izraža tako v kemijski sestavi kot v povišani kurilni vrednosti hidro-oglja.
Keywords: hidrotermalna karbonizacija, globoko evtektično topilo, karakterizacija produktov, izboljševalec tal, biogorivo
Published in DKUM: 22.10.2024; Views: 0; Downloads: 71
Full text (2,69 MB) |
6. Napredni biološko aktivni transportni sistemi ekstraktov manga (Mangifera indica) za terapevtske aplikacije in vitro : doctoral dissertationNika Kučuk, 2024, doctoral dissertation Abstract: Doktorska disertacija je razdeljena na štiri dele, v katerih sta obravnavana študija biološke aktivnosti ekstraktov olupkov manga (MPE) ter optimiranje sinteznih metod transportnih sistemov (alginatne kroglice, liposomi in micelarne membrane mikrobnega izvora), vključno z njihovo funkcionalizacijo z MPE za različne terapevtske aplikacije (in vitro).
V prvem delu smo s pomočjo različnih ekstrakcijskih metod iz svežih in suhih olupkov manga pridobili MPE z visoko vsebnostjo totalnih fenolov, proantocianidinov, posameznih fenolnih spojin, proteinov in nekaterih encimov v aktivnih oblikah ter z visoko antioksidativno aktivnostjo. Nadalje smo potrdili protibakterijske lastnosti testiranih MPE na rast Gram-negativnih (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa) ter Gram-pozitivnih bakterij (Bacillus cereus, Staphylococcus aureus). Z uporabo nizkocenovnega postopka sušenja olupkov manga na zraku smo ohranili biološko aktivnost MPE. Na vsebnost bioaktivnih spojin in biološko aktivnost pa sta vplivala tudi uporabljena ekstrakcijska metoda in topilo. Ultrazvočni etanolni MPE iz suhih olupkov je zagotovil dobro protibakterijsko in antioksidativno delovanje, zato smo ga v nadaljevanju vgradili v različne transportne sisteme.
V drugem delu smo MPE enkapsulirali v alginatne kroglice, proizvedene z metodo ionotropske gelacije. Sintetizirani napredni biološko aktivni sistem izkazuje dobro termično stabilnost s temperaturo degradacije nad 270 °C. Prav tako ni bilo prisotnih razpok na površini sintetiziranih liofiliziranih alginatnih kroglic. Alginatne kroglice so se izkazale kot odličen transportni sistem za enkapsuliran MPE zaradi stabilnosti pri kislih želodčnih pogojih in posledično doseganje tarčnega mesta (črevesje), kjer smo dosegli postopno sproščanje MPE, kar pomembno vpliva na uspešno absorpcijo v telesu. S protibakterijsko študijo smo dokazali pomemben inhibitorni učinek alginatnih kroglic z MPE na rast patogenih črevesnih bakterij E. coli in S. aureus.
V tretjem delu smo optimirali sintezo liposomov za uspešno enkapsulacijo MPE. Za formulacijo liposomov smo uporabili metodo hidracije tankega lipidnega filma z dodatkom 5 mm steklenih kroglic in 24-h stresanjem. Zelo stabilno in monodisperzno formulacijo liposomov z velikostjo delcev <300 nm smo dosegli z uporabo polarnega organskega topila etanola, z uporabo nepolarnih topil pa so najboljšo stabilnost izkazovali liposomi, proizvedeni s kloroformom. Uspešno smo enkapsulirali MPE v liposome in potrdili profil enakomernega sproščanja MPE, vključno z inhibitorno aktivnostjo na rast E. coli in S. aureus. Sintetizirani liposomi z enkapsuliranim MPE se med postopkom liofilizacije niso degradirali, prav tako so bili termično stabilni in ni bilo zaznati signifikantnih kemijskih interakcij med enkapsulirano bioaktivno spojino ter lipidi fosfolipidnega dvosloja.
V četrtem delu smo optimirali gojenje terapevtskih gob Ganoderma lucidum in Pleurotus ostreatus s submerzno kultivacijo za doseganje najvišjega prirasta in posledično najintenzivnejše tvorbe micelarnih membran s sposobnostjo visoke absorpcije vode. Sestava in pH rastnega medija sta imela ključen vpliv na tvorbo membran ter njihove karakteristike. Najustreznejši rastni pogoji so bili zagotovljeni pri bazičnem pH v mediju, ki je vseboval sladni ekstrakt za G. lucidum, in v mediju z dodatkom glukoze za P. ostreatus. Zaradi hidrofilne spodnje površine micelarnih membran so te izkazovale visoko sposobnost absorpcije vode, in sicer več kot 600 % za P. ostreatus in do 500 % za G. lucidum. Potrdili smo prisotnost širokega spektra funkcionalnih skupin, termično stabilnost s temperaturo degradacije nad 260 °C ter vlaknasto in porozno strukturo nastalih micelarnih membran. Micelarne membrane obeh gob smo nadalje uspešno funkcionalizirali z MPE ter dosegli enakomeren in postopen profil sproščanja MPE, vključno z uspešnim protibakterijskim delovanjem funkcionaliziranih membran na rast E. coli in S. aureus.
Keywords: mango, ekstrakcija, polifenolne spojine, protibakterijska aktivnost, transportni sistemi, alginatne kroglice, liposomi, micelarne membrane, funkcionalizacija, enkapsulacija, vgrajevanje, in vitro sproščanje, karakterizacija
Published in DKUM: 02.10.2024; Views: 0; Downloads: 65
Full text (13,98 MB) |
7. Osamitev in karakterizacija bakterije clostridioides difficile iz vzorcev komposta in iztrebkov malih sesalcev : magistrsko delo študijskega programa 2. stopnjeKlemen Tršinar, 2024, master's thesis Abstract: Clostridioides difficile je Gram pozitivna, striktno anaerobna bakterija, ki tvori zelo odporne spore, in velja za eno najpomembnejših človeških črevesnih patogenih bakterij. Čeprav so najbolj raziskan rezervoar bakterije bolnišnična okolja, se v zadnjem času zaradi pogostejših okužb izven bolnišnic pojavlja več raziskav o okoljskih rezervoarjih. Spore, ki jih tvori bakterija, so odporne na različne kemične in fizikalne dejavnike ter se lahko prenašajo med različnimi okolji. Prisotne so v prsti, vodi, domačih kompostnikih, rečnih sedimentih, našli so jih na površinah v gospodinjstvih, podplatih obuval in šapah domačih živali. V okviru magistrske naloge smo preverili pogostost in raznolikost PCR-ribotipov v vzorcih komposta in iztrebkih malih sesalcev. Okrog vsakega od treh kompostnikov smo nastavili 6-8 živolovnih pasti za male sesalce. Vzporedno z ulovljenimi malimi sesalci smo vzorčili kompostnike na treh vzorčnih mestih. Skupno smo tako zbrali 9 vzorcev komposta in 16 vzorcev iztrebkov malih sesalcev. Male sesalce smo determinirali do vrste in jih izpustili nazaj v okolje. Za nadaljnjo analizo smo uporabili le njihove iztrebke. Na bakterijo C. difficile je bilo pozitivnih vseh 9 vzorcev komposta in 2 vzorca iztrebkov malih sesalcev, kar je predstavljalo 12,5 % vseh vzorcev malih sesalcev. Skupno smo osamili 103 izolata, 91 iz vzorcev komposta in 12 iz vzorcev iztrebkov malih sesalcev. Izolate smo razvrstili v 10 različnih PCR-ribotipov. Toksigen je bil samo en PCR-ribotip, in sicer 014/020, ki je pripadal toksinotipu 0. Iz iztrebkov smo osamili dva različna PCR-ribotipa. PCR-ribotip SLO 308 smo izolirali tako iz iztrebka malega sesalca kot iz vzorca komposta na isti lokaciji, kar nakazuje na možen prenos C. difficile med malimi sesalci in kompostom.
Keywords: Clostridioides difficile, osamitev, mali sesalci, kompost, Eno zdravje, molekularna karakterizacija, PCR-ribotipizacija, toksinotipizacija
Published in DKUM: 24.09.2024; Views: 0; Downloads: 45
Full text (4,31 MB) |
8. Protimikrobna aktivnost funkcionaliziranih micelarnih struktur za terapevtske namene : magistrsko deloAnja Mešl, 2024, master's thesis Abstract: Glive predstavljajo dragocen vir prehranskih dopolnil, aminokislin, beljakovin, vitaminov, mineralov, ogljikovih hidratov in maščob. Proizvajajo številne bioaktivne spojine, ki jih lahko uporabljamo v industriji, biotehnologiji, farmaciji in medicini. Terapevtski gobi Ganoderma lucidum in Pleurotus ostreatus se že vrsto let uporabljata v zdravilne namene.
Cilj magistrske naloge je bil optimizirati pogoje rasti micelarnih struktur (MS), kot so pH, čas gojenja in vrsta hranilnega tekočega medija, saj ti pogoji bistveno vplivajo na rast micelija in izoblikovanje MS. Najvišjo prirast MS G. lucidum smo dosegli v hranilnem mediju z dodatkom sladnega ekstrakta, medtem ko za P. ostreatus v mediju z dodatkom glukoze. Ugotovili smo, da je bila pri obeh glivah zagotovljena najboljša rast pri pH 8,5. Nadalje smo z optimiranjem časa ugotovili, da sta za nastanek MS G. lucidum potrebna 2 tedna, medtem ko za P. ostreatus 3 tedni.
MS predstavljajo naravne, trajnostne in biorazgradljive materiale, ki se lahko uporabljajo tudi za terapevtske namene, kot je izdelava obližev za celjenje ran, saj se v njihovo strukturo učinkovito ujamejo različne učinkovine s protimikrobnimi lastnostmi. Proučevali smo morfologijo, kemijsko sestavo in hidrodinamične lastnosti pridobljenih MS. MS smo tudi funkcionalizirali z ultrazvočnim ekstraktom iz olupkov manga oz. antibiotikom ciprofloksacinom kot referenčno učinkovino. Primerjali smo njihove karakteristike z referenčnimi strukturami (MS brez funkcionalizacije z učinkovinami) ter določili učinkovitost ujetja, in vitro sproščanje ter protimikrobne lastnosti funkcionaliziranih MS. Rezultati kažejo na učinkovito ujetje učinkovin v MS obeh terapevtskih gob in postopno sproščanje učinkovin iz MS. Prav tako so MS z ekstraktom oz. antibiotikom uspešno zavirale rast Gram-negativnih (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa) in Gram-pozitivnih bakterij (Bacillus cereus, Staphylococcus aureus).
Keywords: micelarne strukture, Ganoderma lucidum, Pleurotus ostreatus, karakterizacija, funkcionalizacija, protimikrobnost
Published in DKUM: 16.07.2024; Views: 165; Downloads: 43
Full text (4,85 MB) |
9. Microstructure, mechanical properties and fatigue behaviour of a new high-strength aluminium alloy AA 6086Franc Zupanič, Jernej Klemenc, Matej Steinacher, Srečko Glodež, 2023, original scientific article Abstract: This study presents the comprehensive experimental investigation of the microstructure, mechanical and fatigue properties of a new high-strength aluminium alloy AA 6086, which was developed from a commercial aluminium alloy AA 6082. The new alloy possesses a higher content of Si, and, it also contains Cu and Zr. The alloy was characterised in the as-cast condition after homogenisation, extrusion, and T6 heat treatment. Light microscopy, scanning and transmission electron microscopy with energy dispersive spectrometry were used to analyse the microstructure and the fractography of broken specimens. The quasi-static and fatigue tests were performed on the MTS Landmark 100 kN servo-hydraulic test machine, controlled with a mechanical extensometer with a 25 mm gauge length. The quasi-static strength of the analysed aluminium alloy AA 6086 was found to be significantly higher if compared to some other AA 6xxx alloys, while the ductility was kept almost the same. The experimental results of the comprehensive fatigue tests in a Low Cycle Fatigue (LCF) and High Cycle Fatigue (HCF) regime showed a good fatigue resistance, and represent a good basis for engineering design applications of the newly developed aluminium alloy AA 6086.
Keywords: aluminijeve zlitine, karakterizacija materiala, utrujanje, eksperimentalno testiranje, statistično ovrednotenje, Aluminium Alloy AA 6086, material characterisation, fatigue behaviour, experimental testing, statistical evaluation
Published in DKUM: 02.04.2024; Views: 281; Downloads: 38
Link to full text
This document has many files! More... |
10. Razvoj au nanodelcev z metodo ultrazvočne razpršilne pirolize za detekcijo protiteles proti SARS-CoV-2 : doktorska disertacijaŽiga Jelen, 2023, doctoral dissertation Abstract: V doktorskem delu so predstavljene študije, eksperimentalno delo, tehnike karakterizacije, rezultati in analize, s pomočjo katerih smo potrdili hipotezo, da je možno Au nanodelce (AuND) pripravljene z metodo ultrazvočne razpršilne pirolize (USP), konjugirati s ciljnimi antigeni SARS-CoV-2 in rekombinantnim IgG, da bodo delovali v imunoserološkem hitrem testu na lateralni tok (LFIA), za potrditev potencialne prisotnosti protiteles proti virusu SARS-CoV-2. S ciljno izbranimi parametri (0,5 g/l Au, 5 l/min N2, 2,5 l/min H2) smo z USP sintetizirali AuND iz prekurzorja na osnovi zlatovega (III) klorida. AuND smo zbirali v steklenicah z demineralizirano vodo. Določili smo optimalne stabilizatorje in njihove koncentracije: 2,5 g/L PVP 40K ((C6H9NO)n) ter naknadno dodani 1 g/L trinatrijevega citrata (Na3C6H5O7) in saharoze (C12H22O11), da bi preprečili AuND aglomeracijo. Presevna elektronska mikroskopija AuND je pokazala, da so okrogli, s povprečno velikostjo okoli 50 nm in ozko velikostno porazdelitvijo, brez defektov in nizkim ZETA potencialom, 2,4 mV, pri pH 7,5. Za odstranitev vode iz suspenzije z AuND in stabilizatorji je bila uporabljena liofiliazcija, ki je bila izvedena pri naslednjih pogojih: zamrzovanje pri –40 °C, 4 h, atmosferski tlak; primarno sušenje pri +20 °C, 12 h, 1–4 Pa; sekundarno sušenje pri +30 °C, 33 h, 1–4 Pa. Nastali posušeni AuND so ohranili vse lastnosti, ki so potrebne za funkcijo oznak v hitrih LFIA testih: visoka površinska energija, površinska plazmonska resonanca in proste karboksilne skupine za konjugacijo.
V nadaljevanju izvajanja eksperimentov smo, da bi potrdili doktorske hipoteze, izvedli raziskavo in optimizacijo konjugacije AuND z antigenom SARS-CoV-2, ki je bodičasti protein S1 (ak 1-681), in s protitelesi na zajčji IgG (RMG03). Za določitev poteka konjugacije AuND smo uporabili posredne (gelske elektroforeze, UV-Vis, preizkus delovanja) in direktne (XPS, SIMS) metode. Rezultati so pokazali, da se med našim postopkom konjugacije, v fazah čiščenja odstranimo večinski delež PVP in saharoze, ter s tem sprostimo proste karboksilne funkcionalne skupine citratnih ionov, ki so vezani na povšini AuND. Na teh prostih mestih lahko poteče konjugacija prek prostih -NH2 skupin na proteinih. Njihovo funkcionalnost smo ovrednotili z eksperimentalnimi testiranji lastno razvitega LFIA testa. Na osnovi tega smo postavili model in mehanizem konjugacije AuND, ki predpostavlja, da poteka konjugacija z antigeni oziroma protitelesi prek tvorbe peptidnih vezi med N-koncem proteina in prostimi karboksilnimi skupinami citratnega iona, ki je vezan na površino AuND prek svojih karboksilnih skupin.
Za dodatno potrditev funkcionalizacije AuND z izbranimi biomolekulami smo v sklepnem delu doktorskega dela izvedli klinično študijo na pacientih UKC MB, ki je bila odobrena s sklepom KME RS št. 0120-148/2021/3. Rezultati študije so pokazali, da testi dosegajo visoko občutljivost (83 %) tako na vzorcih nosnega sluza kot na vzorcih seruma, slabšo specifičnost (66 % sluz, 74 % serum), visoko negativno napovedno vrednost (94 %) in slabšo pozitivno napovedno vrednost (38 % sluz, 45 % serum). S študijo smo potrdili delovanje AuND v funkciji oznak, saj so se testne in kontrolne linije v lastno razvitem LFIA hitrem testu obarvale.
Keywords: Nanodelci zlata, SARS-CoV-2 virus, stabilizacija, konjugacija, LFIA testi, karakterizacija
Published in DKUM: 28.03.2024; Views: 347; Downloads: 67
Full text (5,61 MB) |
