Search the digital library catalog

Abstract: Magistrsko delo obravnava stabilizacijo encima superoksid dismutaze (SOD), izoliranega iz Pleurotus ostreatus, užitne gobe z odličnimi antioksidativnimi lastnostmi. Glavni namen raziskave je bil proučiti metode sproščanja intracelularnih encimov iz micelija P. ostreatus, nato pa razviti sistem enkapsulacije izolirane SOD za njeno stabilizacijo. Celice P. ostreatus smo odprli z uporabo dveh različnih metod: s konvencionalno metodo mehanske homogenizacije z rotor-stator homogenizatorjem in z izpostavitvijo superkritičnemu ogljikovemu dioksidu (SC CO2). Učinkovitost celične lize smo ovrednotili z Bradfordovo metodo, s katero smo določili koncentracijo sproščenih intracelularnih encimov, nato pa še z modificirano Marklundovo metodo, s katero smo določili aktivnost izolirane SOD. Encimski ekstrakt smo nato enkapsulirali v alginatne kroglice, ki smo jih izpostavili simulirani želodčni (SGF) in simulirani črevesni tekočini (SIF), da bi in vitro proučili sproščanje SOD v telo. Za karakterizacijo površinskih in strukturnih lastnosti ter kemijske sestave alginatnih kroglic smo uporabili vrstični elektronski mikroskop z emisijsko disperzijsko spektroskopijo (SEM-EDS). Prisotnost funkcionalnih skupin v alginatnih kroglicah smo določili s Fourierjevo transformacijsko infrardečo spektroskopijo (FTIR). Rezultati so pokazali, da je mehanska homogenizacija pri lizi celičnih sten bolj učinkovita. Z njo smo dosegli sprostitev 4,07 mg proteinov na g P. ostreatus, medtem ko s SC CO2 le 0,0629 mg proteinov na g P. ostreatus. Specifična aktivnost SOD je bila pri obeh metodah primerljiva. Natrijev alginat se je izkazal kot odlično enkapsulacijsko sredstvo, ki vzdrži pH pogoje želodca in omogoči postopno sproščanje aktivne SOD v tankem črevesju, kar je ključnega pomena za potencialno peroralno aplikacijo. V SGF se je zaradi kislih pogojev sproščena SOD takoj deaktivirala, medtem ko je bila v SIF najvišja specifična aktivnost SOD dosežena po 180 min izpostavitve. Tedaj je za mehansko homogeniziran vzorec znašala 86,2 % začetne specifične aktivnosti enkapsuliranega vzorca, za SC CO2 vzorec pa 91,4 %. Na podlagi dobljenih rezultatov smo zaključili, da odpiranje celic z mehansko homogenizacijo in enkapsulacija v alginat nudita obetavno strategijo za kontrolirano dostavo encima SOD v tarčna področja znotraj prebavnega trakta.
Keywords: Pleurotus ostreatus, antioksidativni stres, superoksid dismutaza, enkapsulacija, alginatne kroglice
Published in DKUM: 20.11.2025; Views: 0; Downloads: 4
Full text (2,83 MB)