Search the digital library catalog

Abstract: Celjenje roženičnih ran je pogosto omejeno s fibrozo in tvorjenjem brazgotin, ki jih lahko povzroča transformni rastni faktor β (angl. transforming growth factor – TGF). Nadzirana fibroza, ki jo lahko usmerimo z inzulinu podobnim rastnim faktorjem – 1 (angl. insulin-like growth factor – IGF) in protifibrotičnimi učinkovinami, bi lahko prispevala k ohranjanju prozornosti roženice med celjenjem. S pomočjo stimulacije primarnih človeških keratocitov s TGF-β v brezserumskem gojitvenem mediju smo ustvarili celični model roženične stromalne rane. S slikovno pretočno citometrijo smo analizirali posamezne celice iz celičnih kultur in določali stopnjo nuklearizacije Smad3 in znotrajcelično fluorescenčno intenziteto obarvanega Smad7 in roženičnega Kristalina – aldehidne dehidrogenaze 3A1. Pri preučevanju izločanja proteoglikanov Biglikana in Keratokana v zunajcelični matriks smo uporabili teste ELISA. Skupaj s stimulacijo s TGF-β smo celice obravnavali samo z IGF-1, s suberoilanilidehidroksiamično kislino (SAHA) ali halouginonom; ločenim populacijam smo poleg protifibrotikov dodali še IGF-1. Pri samostojni obravnavi z IGF-1 smo ugotovili zmanjšano translokacijo Smad3 in zvišano količino Aldehidne dehidrogenaze 3A1 znotraj celic. Poleg tega je bilo izločanje proteoglikanov prav tako ugodno za ustvarjanje pogojev prozornosti. SAHA je povzročila zvišanje Smad7 v celicah in inhibirala translokacijo Smad3 v jedra – tudi v kombinaciji z IGF-1. Imunofluorescenčna mikroskopija je pokazala, da je dodatek IGF-1 in v kombinaciji s protifibrotičnimi učinkovinami zavrl transdiferenciacijo v miofibroblaste in spodbudil nastanek fibroblastov. TGF-β/ Smad signalna pot fibroze in zamotnjenosti roženice je bila inhibirana s strani IGF-1; še posebej ob dodatku SAHA kakor tudi s halofuginonom. Zaključujemo, da bi lahko IGF-1 uspešno dodali k zdravljenju s protifibrotičnimi učinkovinami, kar bi omogočilo boljše celjenje roženične rane in tvorbo bolj prozornega tkiva.
Keywords: Roženica, keratocit, miofibroblast, fibroza, celjenje ran, TGF-b, IGF-1, SAHA, halofuginon, Smad, celična kultura, slikovna pretočna citometrija
Published in DKUM: 14.01.2019; Views: 1884; Downloads: 253
Full text (69,22 MB)

Abstract: Uvod Regeneracija skeletne mišice po poškodbi je omejena s tvorbo brazgotinskega tkiva, počasnim celjenjem in relativno visoko verjetnostjo ponovitve poškodbe. Terapija, ki temelji na pripravkih avtolognih trombocitnih preparatov (ang. platelet-rich plasma; PRP) je v zadnjem času postala izjemno popularna, predvsem v primeru poškodb sklepnih vezi in mišičnih tetiv. Za zdravljenje mišičnih poškodb se PRP še ne uporablja, poglavitni pomislek je, da med ostalim vsebuje tudi rastni faktor TGF-β, ki je pomemben dejavnik brazgotinjenja v skeletno-mišičnem tkivu. V raziskavi smo želeli prirediti učinek PRP-ja za uporabo na skeletnem mišičju. Učinek rastnega faktorja TGF-β smo zavirali z njegovim zaviralcem s ciljem izločitve potencialno neželenega učinka v procesu mišične regeneracije. Materiali in metode Zaradi pomanjkanja znanstvenih temeljev o terapiji z avtologno trombocitno plazmo smo zasnovali predklinično raziskavo, v kateri smo uporabili humano, CD56-pozitivno mioblastno celično linijo. Po dodajanju PRP-ja, dekorina (zaviralca TGF-β) in njune kombinacije v gojilni medij smo preučevali stopnjo proliferacije mioblastov, njihove metabolne aktivnosti, profil izražanja fibrotičnih citokinov in ekspresijo miogenih regulatornih faktorjev. Z uporabo slikovne pretočne citometrije smo analizirali razmerje med hibernirajočimi, aktiviranimi in diferencirajočimi mioblasti ter rezultate primerjali med posameznimi skupinami. Dodatno smo opravili še vizualno analizo izražanja dezmina z uporabo visoko ločljivega konfokalnega mikroskopa ter ugotavljali stopnjo formacije več jedrnih miotubulov. Rezultati Ugotovili smo, da pride v mioblastnih celičnih kulturah pod vplivom PRP-ja do značilnega znižanja izražanja fibrotičnih citokinov, povečanja stopnje proliferacije in viabilnosti celic. Obenem pride prav tako do povečane ekspresije miogenih regulatornih faktorjev, kar pripomore k pomembnemu pomiku v miogeni diferenciaciji mioblastov. V kombinaciji PRP-ja z dekorinom smo zaznali pomembne dodatne sinergistične učinke. Razprava Izsledki raziskave dokazujejo, da PRP ne samo potencialno znižuje brazgotinjenje, temveč tudi pripomore k učinkovitejši mišični regeneraciji, še posebej v kombinaciji z zaviralcem TGF-β.
Keywords: Mišične poškodbe, brazgotinjenje, avtologna trombocitna plazma, rastni faktorji, dekorin, miostatin, TGF-beta
Published in DKUM: 05.07.2016; Views: 1884; Downloads: 269
Full text (8,10 MB)